- 慢病毒或逆轉錄病毒感染細胞中，Polybrene的作用是什么？>>>
Polybrene是常用的助轉劑。它是一種帶正電的小分子，與細胞表面的陰離子結合，能顯著提高感染效率。但Polybrene有一定的細胞毒性，有的細胞對polybrene的毒理反應明顯，因此比較敏感或容易分化的細胞都不能用Polybrene。polybrene最常用的工作濃度為4～8μg/ml。
- EGFP/RFP是否能用于活體成像？>>>
可以用，但是EGFP/RFP等生物熒光背景太高，靈敏度低。雖然RFP的穿透性較EGFP強，但高分文章還是建議用Luciferase。
- RAW264.7轉染效率低怎么辦？>>>
- raw264.7是小鼠腹腔巨噬細胞細胞系,也是常用的炎癥細胞模型之一。其難培養、難轉染、易分化的特點，至今讓很多科研人員頭疼。實際上像這類型的細胞，只有選擇了恰當的病毒載體，轉染效率都能達到80%以上，滿足大部分實驗需要。
- rescue實驗怎么設計？>>>
- rescue實驗，也就是常說的回復實驗，有表型上的rescue實驗，但更多地是機制上的rescue。具體一點也就是說，假設已經做了X基因的干擾實驗，造成Y基因下調，原信號通路的被抑制。editor說不嚴謹，需要做一個rescue的實驗。那么就需要過表達X基因，回復X基因的干擾的影響，從而造成Y基因上調，原信號通路的激活。
- microRNA的一般研究思路是什么？>>>
1. 芯片篩選出可能跟功能表型相關的microRNA
2.QPCR驗證芯片結果，選擇感興趣的microRNA
3.過表達、抑制感興趣的microRNA
4.尋找microRNA的靶基因
5.luciferase雙熒光素酶靶基因驗證
6.rescue回復實驗
- 如果要在同一個載體上表達兩個基因，應該怎么設計載體？>>>
- 想要將兩個蛋白表達在一個載體上，除了選擇Promoter A——gene X——Promoter B——gene Y這樣的結構外，還可以用2A或者IRES來連接兩個目的蛋白，達到共同表達兩個蛋白的實驗目的。當然，如果基因太大，則最好是分開成兩個載體。
- 病毒產品的安全性如何？>>>
使用病毒載體的危險性主要有以下幾個考慮因素：
1)是否能重組產生致病性病毒;
2)是否具備復制能力;
3)是否能整合，并導致癌基因激活或者抑癌基因失活;
4)免疫原性。
我們所使用的病毒載體，全部經過改造，去除了致病性元件和復制功能區，因此重組產生功能性病毒的概率極低。雖然慢病毒具有整合能力，但是我們去除了其3’LTR內的激活元件，排除了其激活下游基因的能力。因此，這些病毒載體用于體外和動物實驗，對使用者而言都具有極高的安全性。盡管如此，我們建議，使用病毒載體進行細胞或動物實驗時，需要遵循標準廢棄病毒載體操作流程。
一部分病毒(腺病毒和腺相關病毒載體)，其整合幾率低，因此安全性高。有的病毒載體，比如腺相關病毒載體，目前被認為是安全性非常高的一類基因治療載體，應用前景非常樂觀。
- 什么情況下應該選用腺病毒載體？>>>
- 細胞實驗中難轉染的細胞，如貼壁不好的細胞，原代細胞，或者體內動物實驗。
- 不同組織適合那些血清型的腺相關病毒？>>>
AAV2/1 肌肉，心臟，骨骼?。òㄐ募。?，神經組織
AAV2/2 中樞神經，肌肉，肝臟，腦組織，眼，
AAV2/3 肌肉，肝臟，肺，眼
AAV2/4 中樞神經，肌肉，眼，腦
AAV2/5 肺，眼，中樞神經，關節滑膜，胰腺
AAV2/6 肺，心臟
AAV2/7 肌肉，肝臟
AAV2/8 肝臟，眼，中樞神經，肌肉
AAV2/9 心臟，肌肉，肺（肺泡），肝臟，中樞神經
AAV2/DJ 肝臟，視網膜，肺，腎臟
AAV2/DJ/8 肝臟，眼，中樞神經，肌肉
AAV2/Rh10 肺, 心臟，肌肉，中樞神經，肝臟
